薄层色谱(TLC)是一种常用的物质分离与鉴定技术,其分析过程可分为以下四个主要步骤:
一、制板
- 材料准备
选择表面光滑平整的玻璃板作为支持物,规格通常为10cm×20cm、5cm×20cm或20cm×20cm。
称取3~5g硅胶,加入0.2%~0.5%羧甲基纤维素钠(CMC-Na)溶液(比例1:2~1:4),充分搅拌均匀。
- 制板操作
将配制好的硅胶溶液均匀涂布在玻璃板上,形成均匀的吸附层。涂布后需在100℃烘箱中干燥0.5~1小时,确保无花斑或水印。
二、点样
- 点样工具
使用微量进样器在薄层板上画一条1cm宽的基线,距底部1~2.5cm处点样。斑点直径建议控制在2-5mm之间,点间距离1cm左右。
- 注意事项
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点样后需等待前一次溶剂挥发后再进行下一次点样,避免斑点重叠;
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样品量不宜过多,过量可能导致斑点扩散。
三、展开
- 展开剂选择
根据待测样品的性质选择合适的展开剂,常见的有石油醚、乙酸乙酯、甲醇等。展开剂需能溶解样品且与固定相(硅胶)有明显分配系数差异。
- 展开操作
将点样后的薄层板放入盛有展开剂的密闭容器中,待展开剂上升时观察斑点迁移。展开速度受展开剂浓度、温度和流速等因素影响。
四、检测
- 斑点观察
通过紫外光灯(254nm)观察斑点位置和颜色。不同物质在薄层上的迁移速度不同,形成特征斑点。
可以使用标准品进行对比,通过斑点迁移距离和颜色相似性鉴定未知物质。
- 结果记录
记录斑点位置(Rf值)、颜色及标准品的对比结果,用于后续分析。
注意事项
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样品处理 :挥发性物质需先浓缩后点样,热敏性物质需低温操作;
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设备维护 :制板时避免灰尘污染,展开时防止溶剂挥发过快;
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安全防护 :使用有机溶剂时需佩戴防护装备。
通过以上步骤,结合标准品的对比,可有效分离和鉴定混合物中的各组分。